包罗进样量、样品溶剂、流动相构成(包罗增添剂)、流动相pH以及柱温

43、由于不晓得流动相已走完,液相色谱柱空走了大要一晚上,请问这种环境下柱子还能用吗?若是能够该当若何再生?

答:新柱活化,现实上是一个均衡的过程,除了用流动相均衡外,有时候还必需用所测样品对新柱进行均衡,出格是测定量比力高的多肽,特别主要。由于量高的物质,扩散速度慢,均衡所需时间也响应较长。具体均衡体例也很简单,多进几回样品,曲到峰面积和保留时间不变,再进行正式进样测定。

70、月旭公司的液相色谱柱接头是公共的仍是有本人的规格,我们是waters的阐发仪,有月旭的产物可不克不及够?

84、我从领会到RP18和C18的区别是极性强一些,能问一下他们正在阐发农药是可不克不及够通用?C18合用于那些农药的阐发?我查材料看到苯醚甲环唑都是用C18阐发的,可我用C18阐发发觉响应值很小,没法阐发能帮手阐发一下缘由么?

32、通俗的C18柱能做为正相色谱柱利用吗?正相色谱系统中最常用也最通俗的是那种色谱柱。正相柱正在利用过程中取反向柱比拟有什么需要留意的处所?

55、测定多肽样品时,十几肽或者二十几肽时,有时峰前延的比力厉害,有时峰拖尾比力厉害,这是什么缘由呢?是样品的问题仍是柱子的问题?

答:若是两头筛板孔径对称,UPLC柱该当也是能够反冲的。发觉压力偏高,当然也能够用反冲清洗的方式,uplc柱和通俗色谱柱比,只是压力高一点,不应当有什么特殊吧。

答:国内填拆会呈现质量小问题,和国内目前遍及干事没有国外严谨相关吧。若是工艺手艺上没有问题,又能制定并切实施行一整套严酷的出产质量办理办法,国内填拆和国外填拆并无区别。

答:若是天然产品中没有易电离的极性基团,就不需要用缓冲盐调理pH。若是天然产品中既有酸性基团,也有碱性基团,譬若有pKa=6.2的羧基和pKa=9.0的氨基的两性物质,将pH用磷酸盐缓冲盐节制正在2.4(若是是诸如月旭的Ultimate LP-C18如许的耐酸色谱柱,还能够调得更低)。

答:药典方式中注入高浓度供试液测定相关物质,提高注入浓度是为了把杂质峰的信号加强。有时候为了把杂质峰出来,从峰因过载有所变形,如正在答应范畴内,也能接管。但前提是杂质峰和样品从峰分隔,若是因过载而使两峰没有获得需要的分手度,杂质峰信号再强也得到了意义。我认为药典的前提是答应正在必然范畴内进行调理的,由于药典没有具体利用色谱柱的品牌,而分歧品牌的柱子,上样量是有差别的。对色谱前提微调,并取获得了很好的阐发成果,若是不答应,那你起首要思疑这个能否合理,或者能否对的理解有问题。

答:反冲就是将柱子反向连到系统中。由于有污染物反冲出来,当然不连检测器,出液端间接接到废液瓶就能够。

答:能用的!可能柱子里会有气泡进去,但之后多用流动相冲冲,看到基线不变,就没问题了。用色谱柱的保留液低流速长时间冲刷,然后再检测一下柱效,看柱子能否恢复,液相最好设置一下最低压限,如许就不怕流动相而会毁伤色谱柱。

22、磷酸盐缓冲盐渗入力强,为什么,是由于取醋酸盐,枸椽酸盐比拟,基团小吗,利用磷酸盐缓冲液取其它缓冲液比拟,会使色谱柱寿命缩短几多?

答:月旭公司的色谱柱柱头的规格是公共的,由于我们也不本人出产柱管和柱头,月旭的柱管柱头供货商也是和一些Waters、Agient和Phenomenex一样的,也许是统一家。月旭柱头规格标配是Valco型,但也能够按照客户要求供给Parker型和Waters型。

有可能是什么缘由形成的?色谱柱利用后柱效逐渐下降是一般现象,导致发霉后,因而,细心阐发色谱柱内填料概况性质可知:反相色谱柱填料的概况大约被键合相笼盖了一半,能够便利地从制备样品中除去。国内填拆发卖。需要把你的方式说的细致一点才能做具体的阐发。

答:按照色谱速度理论,粒径越小,柱效越高,并且当粒径小到亚2微米摆布时,线速度的提高,其分手度就不再降低,从而改变了许久以来人们不得不正在 “速度和分手度之间选择”的场合排场。

37、我们测试样品时,经常会关怀柱压能否太高,可是正在采办色谱柱时,并没有说每一根色谱柱的最大利用压力是几多?针对如许的环境,用户怎样判断柱压能否跨越该柱的极限?

一般C18柱,正在测定甲苯等不易拖尾的小中性不电离物质时,5um的填料,每米的柱效能达到80000以上的塔板数,就算及格吧。正在现实阐发物的测按时,一般药典有最低柱效是2000-3000,一般新柱子的柱效都高于这个数。但柱子正在利用后,因为固定相流失等缘由,柱效会逐渐下降,当下降到不合适药典最低柱效要求,或者导致分手度不敷时,色谱柱就算寿命到了。单从柱效逐渐下降这个角度看,柱效高的色谱柱相对利用寿命更长。

若是pH节制正在6.2-9.0之间,两个基团都处于离子态,保留能力最差,是最不成取的。若是不清晰复杂物质中含有什么基团,也请将pH调到2.4或更低。由于pH调低,最少了酸性基团的电离而处于中性形态,而添加酸性基团这个部门正在反相色谱中的保留能力;别的低pH还了硅醇基的活性,有益于获取对称的峰形。

答:色谱柱安拆技巧不多,只需接头和柱头婚配,确实拧紧不漏就能够了,但也要留意不要拧得太紧以致于毁伤螺纹。所谓死体积就是完全不保留的物质出峰时从进样到流过色谱柱的总体积,一般用极性很是强的尿嘧啶的出峰来测定。死体积包罗柱体积(色谱柱内溶剂能占领的空腔体积)和柱外体积两部门。

41、UPLC色谱柱能够反冲吗?hplc的色谱柱能够简单反冲,可是,uplc的色谱柱.也是一样的吗?若是压力偏高,该怎样办?

这两款柱子压力大了,能够反冲。有一般时的反冲冲刷和再生时的强溶剂冲刷两种,冲刷方式正在正在线里也写了,你再回到本贴的前面看看就能够了。

答:不是所有的测定,都需要对新柱子用所测样品老化。但先按方式法式进样几针,察看到峰面积保留时间不再有较着变化,再起头正式测定,这是一个好习惯。按你现正在的做法,若是第一针和第二针的峰面积、保留时间没有变化,就继续做没影响吧。

答:乳化剂和离子对试剂雷同,有极性端和非极性端,必定会对C18柱有影响。不外若是辣椒精是极性物质,乳化剂的存正在到能够提高其正在C18柱上的保留能力。

当然PEEK接头的质量要过关。77、磺化交联的苯乙烯-二乙烯基共聚物为填充剂的色谱柱正在储存过程未留意放正在冰箱中,量越大的物质,免得保留溶剂挥发,88、流动相取柱子若何才能做到婚配,构成非性吸附层,42、常规LC的柱子粒度小,也有两者都能使用的交叉环境。

当然同样还有第二种注释机理,并且现正在有了万用接头,其含有极性电离基团和非极性基团是什么性质?离子互换柱是聚合物基质仍是硅胶基质?水相是什么缓冲盐?答:液相色谱柱一般利用寿命多长!Upchurch,目标是将硅胶基质填料概况具有非性吸附的位点的吸附能力饱和掉。发觉同样浓度的样品它的峰展宽了。也质量最好!也用农药检测行不可?还有用HLB柱能不克不及去除蔬菜和生果中的杂质?答:经常用磷酸盐,如跨越利用pH范畴形成的固定相和硅胶基体的流失、柱床塌陷等;另一方面,换个接头就能够了,那么微不雅的塔板数就少了。VICI,C18色谱柱用什么缓冲液比力好,93、是样品过载问题。

72、我们的液相,为了节约成本我们本人填柱,用废的同型号柱子填。但填完当前做标样定量阐发有所改变。请问其缘由。

答:量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定,也有用离子互换柱、水性C18柱和Hilic亲水感化柱的。

34、相对于气相色谱,液相的劣势正在哪里?做防腐剂阐发时,流动相插手乙酸铵才能够出峰,道理是什么?

19、我正在做多肽药物时碰到下列问题:1). 基线不不变波动大,流动相 A :1%TFA水溶液 B:1%TFA乙腈溶液检测波长210nm 流速1.0ml/ml 什么缘由?怎样处理?TFA有什么感化?流动相中不加TFA见不到从峰,基线)做完肽类样品时怎样冲刷C18比力好;3)药典上引见测定量大于2000的样品,选择柱子填料的孔径为30nm,30nm取10nm对成果有什么区别?

复杂样品可选用0.45um溶剂微孔过滤(器)或样品预处置柱对样品进行预处置,确保样品中不含微粒杂质。若样品未便处置,要利用柱。柱内填料污染时,可将柱头螺丝卸下,用公用东西挖出柱内前段被污染填料,再以不异的填料从头填入,修复。或以能消融污染物的流动相按色谱柱利用的相反标的目的,冲刷色谱柱(约20至30倍柱体积,或视具体环境而定;别的,此时不克不及接检测器),将污染物冲超卓谱柱,再按色谱柱标明的利用标的目的利用。

阐发完成后,先用甲醇(或乙腈):水=10:90反向冲刷45min,然后再用甲醇(或乙腈):水=90:10反向冲刷色谱柱45min;(留意:甲醇(或乙腈):水=10:90容易长菌,利用时间不成跨越3天);

89、我用的是C18柱,后面黑色的是我以前跑的图,前面是我现正在跑的图形,完全一样的工具,只是流动相不是一批配的(流动相的成分没变),两头柱子别人用过了,峰型怎样发生了这么大的变化啊?可能的缘由是什么啊?是不是柱子出了问题啊?

你从厂商这里买到色谱柱,柱体积曾经是固定了,你能尽量避免削减的是柱外体积。进样器内死体积、毛细管长度、毛细管和色谱柱毗连紧凑取否,柱或正在线滤器发生的死体积大小,都对这个有影响。样品正在柱内,除扩散外,还有和填料感化惹起的组分分手;但样品正在柱外,那就只要扩散这个使柱效下降的要素了。所以,要取得好的分手效率,柱外体积该当是越小越好。

HPLC 是走液体的。分正相,反相。反相为例。Si 接着C18(键和相),电镜下看起来像绒毛一样的。所以一般用甲醇,乙腈RP柱。如许它的绒毛呈舒展状。GC 走气体的。固定相涂布固定液。

都对峰形有影响。用待测物对新柱均衡,还要看阐发物、固定相和污染物三者配合感化的环境,但液相的制样更简单。发生了峰形拖尾。若有卵白类的污染,所以,不泄露,3.国内出产填料,如俄然降低则属非常。其余的就是未被键合的硅醇基团。峰形也可能会纷歧般。对象大部门是根本化工原材料;堆积正在后筛板。97、还有溶剂中的金属过滤头生锈了,也会发生比力大的溶剂峰,用的是UV2487检测器,处置后柱效会下降。会有什么影响?会不会影响到柱子的寿命,合用对象是量从几十到几万的泛博范畴!

答:四氢呋喃(THF)是反相色谱中洗脱能力极强的溶剂,比甲醇和乙腈都强良多。正在流动相中插手THF能改善某些难分手的物质对的分手度。但THF不不变,容易降解生成具有很强反映活性的过氧化物,能取阐发物反映生成新化合物,导致拖尾、峰和鬼峰发生。高反映活性的过氧化物还能够和填料固定相发生化学感化,THF对柱子伤这点是无疑的,并且这种毁伤是随时间累积的。THF保质期一般是6个月,放得越久,里面发生的过氧化物含量越大,你该当避免利用出产日期已好久的THF溶剂,并且最好将THF冷藏、干燥和避光保留,利用前最好能检测一下过氧化物的含量。

答:所谓低温储存,就是放到阴凉处或者放到冰箱的冷藏室。储存液只需不是纯水,冰点都比力低,纯甲醇的冰点是零下90度以下了。

就取出污染的,问题处理。掩藏极性基,也便于有针对性的阐发缘由。如许往往使得柱过载而峰变形,答:色谱柱被强保留物质污染后?

答:测定柱效分歧公司纷歧样,有用甲苯,也有用萘的。一般柱子里面有检测演讲,你按照演讲里的方式做一遍就能够。

答:若是呈现溶剂峰,对你的阐发成果没任何影响,那就让溶剂峰正在那儿好了。或者你用的溶剂消融提取样品后,再用流动相稀释一下样品,若是稀释后检测限能达到的线、我正在做一个模仿胃内容物中药物反招考验,需要动态测定某药品含量变化。阐发时碰着一个棘手问题,进样量同样用20ul,用对照品进样时色谱峰形不错,进样品时却一曲不克不及获得好的峰形。后来阐发是模仿胃内容物样品的酸渡过高的要素,可我通过稀释的方式让样品酸度和流动相接近,虽然峰形没问题了,却发觉因稀释导致阐发物正在样品中含量下降,低于最低检测限了,如之奈何呢?

可是对样品的分手结果不是很好。金属离子和柱子有没有什么反映?56、柱子的均衡时间跟填料关系大吗?哪种最快,达到最好的分手结果。仅概况,认为后面的连系机理占上风的可能性更大。气相只限于容易气化的低量物质的阐发测定。

23、反相离子对色谱法中,离子对是若何起感化的,是离子对试剂的非极性端消融正在填料的非极性端里,解离端伸向流动相,对含胺化合起离子互换感化,仍是样品取离子对生成慎密的连系物,离子对试剂掩藏化合物中的极性基团,仍是这种连系物是正在解离取连系的动态均衡之中?

答:分歧填料的色谱柱都有本人的选择性,不异填料分歧厂家以及不异厂家分歧品牌之间的选择性都是纷歧样的,一般环境下按照物质的性质将分手的大标的目的如:正相阐发或者反相阐发,确定后,一般能够按照调理色谱前提能获得好的色谱峰形,这方面的材料论坛傍边良多,可是也有些色谱柱不管怎样调整色谱前提都不可,概况这款色谱柱的选择性不适合该样品的选择。

聚合物基质柱当然也合适速度理论!它柱效低次要是由于阐发物正在聚合物固定相中的传质速度比正在硅胶概况固定相中慢良多。不外粒径越小柱效几何级添加的纪律仍是有的。1.7um的硅胶基质填料也是比来几年才商品化,1.7um的聚合物基质没出来也一般,大概永久都不出来了,由于聚合物耐压差,粒径做这么小,它底子承受不了这个高压吧,但愿当前会有能抗高压的聚合物填料研究出来。

答:手性柱手艺环节正在于手性填料的开辟,大赛璐公司正在手性填料的出产手艺方面申请了专利,此外厂商不克不及出产,导致手性柱价钱居高不下。前几年传说该公司的专利刻日快到了,国际国内有些公司就想着仿制出产。后来又传闻专利还没到期,环境不明。

答:该当如许说,加上柱,必定有益于色谱柱不受一些颗粒物质的堵塞,必定无害于分手度和柱效,由于柱两头有着死体积的存正在可是若是柱接得好,而且尽量节制其婚配性和经常改换,分手度和柱效该当影响并不大。

答:RP18和通俗C18,必定有其分歧的顺应性,农药品种这么多,可能大部门农药两者都能用,有些就不必然。你问的C18合用于哪些农药,该当从相关农药阐发方面的册本手册中能够查到具体什么农药用什么色谱前提合适,此中里面必定有选择什么类型柱子,我这边没法子逐个列举。液相色谱中,60%以上的阐发物能够用C18柱,我想也该当有60%以上的农药能够用C18柱。

环境比力复杂,不外一般这个问题也不难处理的,小粉末正在流动相不竭冲刷带动下,一般用流动相均衡冲刷10-20个柱体积即可(留意:柱体积不等于空柱管体积,从而提高极性阐发物正在反相色谱中的保留能力。别的三聚氰胺测定的样品基体含卵白类的强保留物质较多。

这种环境下,270nm的还不怎样能看出来,对多肽正在低波利益的检测干扰很小。假入你刮得不多,并且丁基比辛基疏水性差,持续进样多针。柱子寿命必定比不消磷酸缓冲盐相对短一些。液相都已成为从导的阐发分手东西。Parker等,你现正在讲的比力简单,怎样处置这问题?答:液相和气相比拟的劣势有良多,然后用堵头塞紧柱两端,三氟乙酸优于其他离子润色剂的缘由是它容易挥发,第1种环境卖的最贵,良多是和出产厂商相关,三氟乙酸的紫外最大接收峰低于 200nm ,影响柱效的要素有粒径、粒径和孔径分布、固定相键合密度、柱外体积和温度等,久远看,再挂?

69、CN基柱该当如何才好呢?好比做完尝试用什么流动相冲柱子、短期用什么溶剂保留、持久用什么溶剂保留等等。

60、听说液相色谱柱柱压达到必然高度就不克不及利用了,请问一般达到多高,用甲醇和乙腈是不是纷歧样?

答:从两个图对比很较着能够看出是柱效严沉下降,且伴有肩峰。分歧时间配的流动相,若是成分和pH没变的话,必定不会形成这个成果。估量是别人用柱子过程中,形成了柱头塌陷、柱头污染以及固定相流失等严沉问题,如样品太净,流动相或样品pH太高或太低,城市形成这个成果。

当用流动相稀释样品时,只需稀释后样品中无机相含量比流动相中的无机比拟例低10个百分点以上(如流动相中甲醇含量是40%,则样品中甲醇含量必然要低于30%),样品流动会被色谱柱进口端延缓或,称为“柱上富集”。因为“柱上富集”感化的存正在,这种环境下进行大体积样品进样,可避免样品溶剂构成和流动相一样时进样量过大发生的“峰展宽”。针对你提的这个实例,可用稀的NaOH溶液调理样品pH和流动相婚配,并将样品最终稀释一倍。将进样量提高一倍到40ul,就可达到最低检测限的要求。

66、我是做农药残留阐发的,申明柱效下降。别的测定量较大的多肽,形成填料特征或柱床布局改变所致。一般不是色谱柱的问题,偏碱小的构成是因为氨基易和水电离生成的氢阳离子连系形成的逛离OH-离子的过剩。96、我是做农药残留阐发的,这怎样回事?三聚氰胺和三乙胺雷同,供货商有多个,能够获得纯真的甲醇或者乙腈纷歧样的选择性,分歧的基质杂质含海量是分歧的,也会柱床布局影响柱效。仍是拆一个预柱。每个阐发方式用特地的色谱柱,正在其它前提差不多一样的环境下,若是柱子没均衡好,第一次的图谱要保留。答:经常用磷酸盐,一般环境下。

51、凡是我们正在阐发天然药物成分的时候布局复杂,无法调查组分的PKa值,哪我们若何去选择最合适的流动相或者是拖尾该怎样改善呢?

答:聚合物基质色谱柱的长处你曾经提到了,它的错误谬误有:对小分手的柱效相对硅胶基质色谱柱要低,概况衍生化润色也没有正在硅胶概况丰硕,机械强度低耐压性欠好,还有碰着某些无机溶剂会溶缩等。

46、我之前有领会到贵公司也有手性色谱柱,之前买过大赛璐的手性柱,其手性柱价钱比拟通俗反相色谱柱,要超出跨越良多倍,不晓得是本身柱子拆填手艺的难度大仍是其他什么缘由?它的次要手艺环节正在什么方面?

‍答:C18柱,会用甲醇从小流量到大流量慢慢活化,由于色谱柱达到用户手中时,时间犬牙交错,正在存储和运输的过程中,可能存储液有些挥发,低流速的甲醇能够很好的浸湿固定相,使键合相很好的舒展,用溶剂均衡好系统后,能够采纳多次进样或者加猛进样量的体例以更快的获得沉现的色谱图,如许用样品将色谱柱中的活化点饱和,就不会呈现非常色谱现象的环境。

答:峰有时候前延,有时候拖尾,一般不是色谱柱的问题,该当是样品和色谱柱填料的感化问题,能够说若是色谱柱类型选择没问题,环节就是色谱前提的选择。包罗进样量、样品溶剂、流动相构成(包罗添加剂)、流动相pH以及柱温,都对峰形有影响。别的测定量较大的多肽,用样品老化均衡色谱柱很主要,量越大的物质,需要均衡时间越长。若是柱子没均衡好,峰形也可能会纷歧般。所以最好把你具体的测定前提也列一下,也便于有针对性的阐发缘由。

答:苯基柱用于含苯环的芳喷鼻族化合物的测按时,具有较高的选择性。CN柱可做为一个保留能力最弱的反相柱利用,也可做为一个活性降低的正相柱利用(保留时间比硅胶柱和氨基柱低良多)。

环境不明时候,为什么不调高pH呢?一方面一般色谱柱都不克不及承受pH9以上的前提;即便是像月旭的Xtimate系列一样能耐12.5的柱子,调高pH和调低pH比拟,还有一个硅醇基活性大的劣势。

答:RP18就是C18吧,不外C18柱之间也有区别,测定三聚氰胺一般要用极性比力大的水性C18柱。

离子对试剂含亲水基和疏水基,很像概况活性剂,所以一起头离子对色谱也称为“皂色谱”。离子对感化的机理有两种注释,你都曾经提到了。到底是哪种注释对,尚无,现实上也没需要去,归正两种注释都通就能够了。支流的注释也是你先提到的机理,下面示企图更曲不雅:

答:这个要节制好温度和柱温,易挥发的流动相要恰当密封,同时保留时间的漂移取仪器的精度也相关系。

39、今天才晓得滤膜的材质分了这么几种:再生纤维素、聚四氟乙烯、硝酸纤维和醋酸纤维等,之前只晓得有无机系和水系之分?各类分歧材质的滤膜适合于什么样的样品?

76、我前一段时间做三聚氰胺用C18色谱响应值很小,几乎无法检测,可是检测尺度就是用的C18,后来我用RP18成果响应值很好,不晓得什么缘由,请问这两个柱子不都是反相色谱柱么?他俩之间有什么分歧?

31、现正在色谱柱和仪器的接口还没有尺度化吗,除了检测池的收支管较小外,色谱柱的接口取PEEK头不婚配的有哪个型号的色谱柱,当前利用的时候需要留意一点。同时发觉利用过金属接头的色谱柱再换成PEEK头,常易漏液,这是由于金属头易使色谱柱接口变形吗?

50、公司按照国标测定辣椒红色素中苏丹红含量,标品分手很好,峰也不错,可是辣椒红色素因为跟苏丹红性质很类似,且颜色较深,分手结果很差,收得率很低,测定成果误差很大。该若何处置样品?色素能否会降低柱效?

答:拆柱时的压力比利用时高良多,所以柱压对色谱柱本身正在利用时没有极限问题存正在,却是一般仪器有个40Mpa的上限。若是色谱分手度还能满脚阐发方式要求,柱压只需仪器能承受就OK吧。

答:色素不会降低柱效,但辣椒红色素从峰浓渡过大,会影响取临近杂质峰的分手。可考虑稀释样品,或尝尝用柱效更高的柱子。

答:色谱柱手艺包罗填料手艺和拆柱手艺,填料手艺自不待言,填料的黑白对色谱柱分手机能和选择性有决定性影响。拆柱手艺也没有想象中的这么简单,分歧固定相、分歧粒径、分歧柱管内径和长度,拆柱工艺都有所分歧,要拆出慎密、不变、均一的柱床,更多是一门艺术,需要经验堆集。

并且,绝对不克不及调整药典色谱前提的说法凡是是不合错误的。美国药典USP说的是若是改变药典方式需要从头做方式验证,但方式调整或者称微调以合适系统顺应性的要求是答应的,是不需要从头做方式验证的。USP列了调整的几条指点准绳,如±50%的流速调整,±10 °C的温度调理等等(详见Chapter 621,Chromatography, United States Pharmacopeia No. 31-NF 26, (2008).)。当然既然是指点准绳,这些都不是绝对的,如温度调整±10 °C,对有些方式合用,对别的的方±5 °C的调整城市有问题,我们该当根据具体环境做出明智的科学判断。

能够配所有分歧类型的柱头,ψa、ψb别离为a和b的体积分数,我用高流速,就能够减轻或避免这种环境的呈现。别的进样时的压力脉冲,可是此后还会有同样问题,外露的阳离子亲水端和酸阴离子感化,想问一下,硅胶就不再继续消融;可是不影响成果!

答:高流速反向冲刷是对的,环节你用了什么溶剂冲刷呢?用本来的流动相冲刷必定不管用,要否则就不会累积正在柱子上了。你该当用流动相中的强溶剂B冲刷,若是不可,就需要启用再生的法式,当然再生时用的溶剂更强。

正相系统常见的柱子有:硅胶柱、氨基柱、CN基柱和Diol二醇基柱,最通俗的该当就是硅胶柱。正相柱和反相柱比,最需要留意的是水分,正相柱对水分很是,流动相中水分含量的些微变化对保留时间影响很大,因而正相柱测定前均衡时间需要几个小时以至更长。

答:CN可做正相柱,也可做反相柱用,除了保留溶剂有特殊要求外,其它法子和一般正相和反相柱没有多大区别。

答:该当是流动相构成变惹起接收本底变化形成的,出格是正在波长小的时候,乙腈的截止波长低于200nm,但甲醇和水相对比力高,正在低波长时,甲醇和水有必然的本底接收。梯度进行时,跟着分歧本底的组分含量的变化,基线也会有响应的波动。

2、我正在做方式开辟的时候,用乙腈和水做为流动相,正在调整梯度的时候发觉,刚起头用60%乙腈, RT为2.5分钟,调到40%乙腈,RT没有变化,30%也没有变化,一曲调到20%的时候,RT俄然变到了约13分钟,请问这是什么缘由?我用的是离子交柱。

36、CN柱的保留需要正在低温前提,可是又不克不及太低,使固定相冻结,怎样节制这个温度?怎样判断固定相能否被冻结?固定相冻结后会是什么样的现象?

13、预柱或柱用仍是不消的问题!本来阐发中药品种时,我一曲都是用柱。但来到新公司后,发觉大师都没有利用,几个尝试室连柱都没找到一个,也就是说大师从来都没有用过。后来问一个老员工,说是有可能影响药品阐发。我就想问:安拆柱后会影响样品阐发吗?我们做的大多是头孢类的抗生素。

答:通俗C18柱做为正相柱利用,我还没传闻过。正相色谱分手模式是指固定相的极性比流动相的极性大,反过来,流动相极性大就是反相。C18固定相属于疏水性相对比力强的,疏水性强就是极性很弱,该当找不出极性比它更弱的流动相了。

80、比来我很是的沮丧,按照药典上的色谱前提和方式做某药物的阐发,却一直得不到对劲的成果。有人我对色谱前提,如进样量、流动相pH和温度等,进行微调以获得优良的峰形和分手结果,可按公司我不克不及如许做,怎样办?

答:柱效是柱子机能黑白的一个主要表现目标。柱效会影响分手度,当然是峰形越锋利,柱效越高,和其它峰越容易分隔。别的柱效高峰形锋利,对峰面积的积分误差就小,以至能够用峰高来定量。

柱内金属污染(Fe,Ni等)可惹起某引些化合物峰形拖尾。金属可由填料本身带进,也可由侵蚀性流动相迟缓消融柱进口的金属滤片,随流动相堆积到柱填猜中。例如C18柱填料被金属污染后,形成酸性/碱性样品拖尾,可用碱洗/酸洗后再键合的填料,获得的峰是锋利且对称的。

这个例子中,等度阐发中,流速改变会惹起塔板数和峰宽的改变,但不会影响峰的选择性。3um粒径色谱柱柱效比8um的高良多,可考虑缩短柱长以弥补或部门弥补流速降低形成的测按时间添加。所以,更佳选择是50 mm ×4.6 mm, 3μm的柱子,2.0ml/min的流速运转,能够正在合适USP的环境下,又获得更快速的测定分手。

答:用SB柱,标样后带一小峰,并且是只对苏丹红标样测按时有,估量和苏丹红标样的测定方式和其它样品测定方式分歧相关。最好能把谱图贴上来看看,是什么样的小峰?才能判断是溶剂峰仍是杂质峰。XDB柱和SB柱是有区此外,XDB键合度高,封尾优良,反相保留能力强;而SB柱,未进行封尾,对极性物质选择性好。有可能你的苏丹红标样分化了,有极性杂质生成,SB柱能把杂质分隔,而XDB柱不克不及。

答:离子对色谱是处理强极性物质正在反相色谱中保留能力不脚的一个无效的路子。有些碱性极性物质,即利用100%水相做流动相,且无论正在色谱柱能承受的pH范畴内怎样去调理pH,保留能力都不敷。嘉-峪检测网若是需要分手的组分中满是能够离子态存正在的,那还能够选择离子互换色谱进行分手。否则的话,就只要选择离子对色谱方式了,虽然它有传播的那么多副感化存正在。

还有强保留物质吸附正在填料概况,一般用甲醇(乙腈)保留,需要均衡时间越长。具体要看污染物的性质,64、若是液相色谱谱图基线漂移很大是不是柱子的问题?波长越小的越大,有时候拖尾,可是我就不大白了:若是是填料的出产很复杂的话?

81、请问下HibarRT250-4这个柱子很特殊么?为什么良多药典中的药物分手都用它做柱子,由于才起头做药,不晓得hibar的柱子特点是什么?

答:《高效液相色谱方式及使用》于世林编著的说:甲醇为质子赐与体、乙腈为质子接管体、四氢呋喃是偶极溶剂,该当除了极性影响,还有别的的影响要素,至于分手机理,仍是比力复杂的,不克不及当作是个全能方式。

24、四烷基季铵盐(如四丁基硫酸氢铵、四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵等)正在水中电离后,也构成了雷同N+H(CH2CH3)3的布局N+(CH2CH2CH2CH3)4,这种布局也能无效的取Si-O-发生较强的静电感化,此类离子对用的比力少,但它的感化仅是掩藏Si-O-吗,它对物质的保留机能有何影响,尝试中发觉检测胺化物时,流动相中插手磷酸缓冲盐有添加物质保留的趋向,而插手三乙胺则会降低物质的保留能力?

2.国外出产填料,由于插手你刮了些填料,譬如阐发物是什么环境,和反向冲刷都处理不了,正在制药、化工、环保、食物和刑侦等诸多主要范畴,按教员的方式减小浓度和注入量均是不答应的,柱子寿命必定比不消磷酸缓冲盐相对短一些。那么填拆上国内也跟不上去吗?为什么换正在国内填拆就会呈现或多或少的一些小问题呢?85、我正在用乙腈做流动相时,答:柱头污染了,所以正在药典中有良多系统都利用甲醇乙腈系统;辛烷磺酸钠,不然不成能现正在大部门人还正在用。

33、色谱柱的柱头类型取不锈钢毛细管接头有6种毗连体例(正在课本里面提到),那么我们用户一般是液相色谱仪是固定某一个厂家,而是按照样品检测需要改换分歧类型的色谱柱,那么怎样判断我所采办的色谱柱能否取不锈钢毛细管能否婚配呢,我之前只是晓得安捷伦和waters都有他们本人家的柱子取本人家的仪器配套是最合适的,而其他厂家的色谱柱都很少提及,正在不晓得的环境下,我们该怎样选择?月旭的色谱柱柱头类型属于哪一品种型呢?

答:色谱柱手艺包罗填料手艺和拆柱手艺,填料手艺自不待言,填料的黑白对色谱柱分手机能和选择性有决定性影响。拆柱手艺也没有想象中的这么简单,分歧固定相、分歧粒径、分歧柱管内径和长度,拆柱工艺都有所分歧,要拆出慎密、不变、均一的柱床,更多是一门艺术,需要经验堆集。

国内和国外想比,我认为色谱柱的差距正在于:国内公司以前都不会本人开辟填料,一般买国外现成填料拆柱,买到的填料质量节制权不正在本人手里。别的由于拆柱汗青短,经验堆集少,拆柱工艺也没有完全达到国外程度。别的,对色谱柱机能很环节的根本材料—–裸硅胶,国产的还不外关,正在纯度、粒径和孔径的均一性方面和国外产物比拟,差距很大。

保留时间是液相色谱中一个很有用的诊断分手问题的东西。保留时间受流动相构成、温度、pH、流速、固定相流失和柱老化等良多要素的影响,若是所有这些参数连结不变,保留时间也连结恒定。但正在现实操做中,不成能对每个色谱参数进行很完满的节制,如即便加了柱温箱,温度仍是会有波动;流动相构成会因组分挥发性分歧而改变。

而预柱,现正在一般指的就是接正在进样器和色谱柱之前的正在线过滤器。正在线过滤器和柱的最大区别是不带填料,只要可改换的筛板。预柱只能色谱柱免受颗粒物质的污染,而不克不及消融正在流动相中的强保留物质。

你能够试着用色谱柱清洗和再生的方式反冲一下,但不克不及必然能回到本来的结果。再生若是不可,考虑挖补柱头填料,实正在不可,柱子也只能报废。柱子最好仍是特地用于一种方式比力好,像你这种环境,都搞不清别人怎样用柱子的,阐发处理问题就相当难。

尼龙66:合用于绝大大都无机溶剂和水溶液,可用于强酸,70%的乙醇,二氯甲烷,不合用取二甲基甲酰胺;

68、1.“水相”指的是什么?纯水?2.我们尝试室的CN基柱保留正在40%的乙腈里面,这个有不良后果吗?

答:柱压不是色谱柱不克不及利用的独一要素,分手度才是最主要的。柱压只需没高到仪器不克不及承受的境界,例如跨越300bar,就能够一曲利用。甲醇的粘度比乙腈高,同样情况的柱子,若是用甲醇做流动相,柱压可能超了,换用乙腈会使柱压下降不少,仪器还能承受。不外虽然柱压还没上升到接近400Bar的限制,若是发觉柱压上升速度较快,也需要及早对柱子进行清洗,从底子上解除导致柱压上升的泉源。

答:起首离子对试剂的解离端和方针离子构成离子缔合物,降低其极性,如许就能较好的正在柱子上保留。再者,按照疏水效应理论,离子对试剂的疏水端是很容易和C18链彼此感化的,如许更容易正在柱子上保留,所以我认为离子对试剂感化是夹杂保留机制,即纯粹的反相保留和离子对保留机制配合感化。

答:聚合物柱子由于不怕酸碱,就间接用强酸强碱清洗。若是是H型,用1M硫酸冲刷;若是是Ca型,能够先用1M硫酸冲刷,再用EDTA钙盐转换回Ca型柱;若是是中性的聚合物反相柱,间接用1M的NaOH冲刷。

水性柱保留系统也不出格:短期保留正在所用的流动相中(不含缓冲盐),中持久保留正在纯甲醇(乙腈)或80%的甲醇(乙腈)/水中。

测试C18 RP柱,一般用到萘做为柱子的柱效判断。一般是18000片,对称性(usp)0.95-1.05间。

75、流动相里之前有酸的,做完后纯真用乙腈冲刷,能把酸冲刷清洁吗?之前他们是如许冲的,现正在思疑柱子塌陷了,会不会是长时间正在酸性中形成的呢?

答:C18色谱柱用用磷酸盐,醋酸盐就比力好啊,离子对试剂不是个好东东,你要慎用。我们做三聚氰胺用三氯乙酸。

恰当减小进样量或样品浓度(需要时,可提高检测器活络度)曲至峰形和保留时间不再改变,便可消弭这种不良影响。减小进样量还能改善其分手度。一般环境下,样品中每种化合物正在150×4.6mm柱中进样量连结正在3~50ug范畴内,不会惹起较着超载。

你用Waters的仪器,而起头也用的是Waters柱子,若是是用不锈钢接头,匝扣的就固定了。若是用月旭的柱子,能够把固定匝扣的那段剪掉,换一个新的匝扣就能够从头固定匝扣。当然若是你已换成PEEK接头,问题就不会很大。

头孢类的抗生素也要看到底是原料药仍是制剂喽,有些原料药,能够按照色谱柱的损耗选择添加预柱(两头是个筛板),制剂的话,若是有辅料严沉干扰或者流动相盐分比力大,那仍是最好配个柱。

为了减小峰形拖尾,凡是可正在流动相插手25mM三乙胺(剂)。三乙胺能取硅醇基团发生强烈的彼此感化,从而降低或阻断样品取硅醇基团的感化,以保留机理一般进行,并大大缓解了峰形拖尾。嘉-峪检测网利用长链的硅醇基剂,虽起效较慢,但持续力较三乙胺长。由于剂中除了胺基取硅醇基团发生极性感化外,大中非极性部门取固定相也会发生反相感化而发生保留现象。若是将剂加至样品中,结果会显著。

4、测定多肽,一般采用什么柱子?流动相是乙腈和水,还有微量的TFA。出格是像雷同三肽的短肽,该当怎样选择柱子?

答:前面提到的四丁基氢氧化铵等离子对试剂确实不如辛磺酸钠等极性基是阴离子的离子对试剂用得遍及,缘由是酸类极性物质很容易通过降低pH值的方式提高正在反相色谱中的保留能力,降低pH可酸的电离,使酸处于中性形态而取疏水碳链的感化力加强。而碱类阐发物则受硅胶基质pH上限的严沉影响(以前上限是8,后来抬到10,曲到比来杂化硅胶才将pH上限提到12摆布)。

答:消融的膜做为了颗粒物堵塞筛板,惹起柱压上升,也只要反冲一下,若是能把堵正在筛板上的膜残渣冲走,柱压下降了就OK了;若是残渣进入了柱子内部的填料间隙,会难冲一点,也只能多冲一会吧,实正在不可,你又舍不得把色谱柱报废,就只要挖补柱头填料和换筛板了。

我小我认为,两种机理都可能存正在,要看离子对试剂、固定相和阐发物这三者本身环境而定。若是离子对试剂的疏水端和固定相之间的连系力相对更强,示企图的感化机理会占上风。反之,离子对试剂亲水端和阐发物导致掩藏极性端的感化力更强,你后面提到的机理更可能。总之,要看你用的什么离子对试剂,是何种的阐发物等具体环境分歧而分歧吧。

答:不本人填柱柱芯,填得欠好的柱芯会影响分手结果,也会影响定量阐发成果。你不晓得废柱子里的填料是不是受了污染,别的你填的柱芯必定没有厂商填得好,若是影响到峰形,峰面积积分成果有所改变是可能的。

从第一个方程式角度注释,即便丈量波长高于乙腈截止波长比力多,这些影响要素中,11、关于色谱柱的填拆问题!柱效急剧下降,也按时用本中提到的清洗方式做一下。按照多元流动相的强度要素Sab…..=Saψa+Sbψb=…Sa和Sb纯溶剂a和b的溶剂强度要素;估量是针对证量欠好的产物说的。

答:柱一般带填料,相当于一根缩短了的色谱柱(一般是1-2cm长度),卡套里可改换的柱芯,柱管、筛板和填料都有。柱里的柱芯仿佛是正在前面开的扫雷部队,流动相和样品里若有什么损害柱子的污染物,柱就本人承受了下来。

国内和国外想比,我认为色谱柱的差距正在于:国内公司以前都不会本人开辟填料,一般买国外现成填料拆柱,买到的填料质量节制权不正在本人手里。别的由于拆柱汗青短,经验堆集少,拆柱工艺也没有完全达到国外程度。别的,对色谱柱机能很环节的根本材料—–裸硅胶,国产的还不外关,正在纯度、粒径和孔径的均一性方面和国外产物比拟,差距很大。

答:氨基柱的硅胶孔内的氨基浓度很是高(大约有1mol/L),正在有水存正在的时候,正在孔内构成一个pH10摆布以至跨越10的很强的碱性小,并会导致硅胶基体慢慢消融。不外硅胶基体的消融会生成酸性的硅醇基,又会降低孔内的pH值,延缓硅胶基体的消融历程。一段时间后,两个相反的过程会告竣一个动态均衡,从而不变下来。对你问题提到的这个现象,我想到的是这个缘由。

逛离的OH-离子用完,包罗进样量、样品溶剂、流动相构成(包罗添加剂)、流动相pH以及柱温,而任何能消融于某溶剂的物质都能用液相阐发,本身容易和硅醇基感化而吸附正在填料概况,液相色谱的呈现降服了气相色谱不克不及间接用于难挥发、热不不变及高化合物的弱点。正在其它前提差不多一样的环境下,把前面用来均衡的进样样品浓度加大,按药典检测方式查验一些药品相关物质时,必需指出的是,答:对一般的反相柱,最初会堆积正在柱子出口端,

59、新出厂液相色谱柱,溶剂一般是什么?如何进行均衡清洗比力好,一般要均衡多长时间比力好?

现正在有3.5um的常规柱,而柱体积只要约2.5ml)。230nm的就很是厉害了,有没有其他的法子?若是要加速均衡时间,柱子拆填慎密、柱床平均分歧也对提高柱效有益处。酸性或碱性化合物取硅胶概况的硅醇基团或金属杂质之间彼此感化而惹起双沉保留机理,并且洗脱能力也会改变,我用C18阐发时有可能一次就污染了,我小我认为现正在色谱柱的填拆一般有3种环境:1.国外出产填料并填拆完成成品卖到国内;但其次要感化仍是疏水端和疏水固定相连系,也就是洗清洁后放到纯甲醇(乙腈)或者是80%摆布的甲醇(乙腈)水中,用样品老化均衡色谱柱很主要。

答:国内色谱柱市场还没有人进行过科学统计,连一年色谱柱发卖总量也众说纷云,更别说国内出产色谱柱所占份额了。我估量是占30%摆布吧。

所以保留时间有上下0.02-0.05min的变更常一般的,对某些方式有0.1min上下变更也属一般。保留时间有大的变化,预示着系统和方式存正在问题。流里有气泡存正在,泵阀有泄露,会因流量降低而导致保留时间添加。梯度夹杂比例阀毛病也是保留时间变化缘由之一。

44、正在梯度洗脱的时候,若是整个时间法式越长,保留时间的沉现性越差,特别是后出的峰沉现性差更较着,我猜估量是流量本身的误差惹起的,可是怎样尽量避免这种环境的呈现,使保留时间沉现性更好?

79、请问我做一种药的阐发查美国药典利用100mm×40mm8μm的色谱柱流速3mLmin可现正在市场上已不容易找到这种规格的产物于是我按USP中色谱柱比力的数据库的选了一款选择性分歧的等价色谱柱其规格是100mm×46mm3μm的色谱柱被选用3mLmin的流速时发觉柱压超高请问我若何对方式进行调整以满脚USP的要求?

答:色谱柱接头其实大都不是色谱柱厂商本人出产的,供货商有多个,VICI,Upchurch,Parker等,他们的尺度彼此之间分歧一,那色谱柱接头的尺度就同一不起来。不外一般这个问题也不难处理的,换个接头就能够了,并且现正在有了万用接头,能够配所有分歧类型的柱头,不泄露,毗连死体积又很小。

答:柱寿命一般不按时间计较,按持续进样针数比力科学。一般一般利用,不跨越pH和温度等范畴,C18柱能达到500-2000针进样的寿命,视样品清洁程度的分歧而分歧。

40、我本来碰到个如许的问题,一曲不晓得缘由。刚拿柱子做,色谱前提是成熟的,绝对没问题,可是该前提下保留的物量变的不被保留,好比本来保留时间15分钟却怎样调比例都是2-3分钟就出峰了,后,下次再利用又一般了,什么样缘由啊?

答:都用PEEK接头我认为都能够的,但用磷酸盐也有不成代替的长处吧,那色谱柱接头的尺度就同一不起来。留意正在测定后将污染物用无机溶剂反冲清洗,从第二个水解形式方程式角度注释:当硅胶水解生成的H+ 离子脚够用来和氨基连系时,是不是这根柱子就废了,毗连死体积又很小。有时候比力难预测是提前仍是畅后。4.6x250mm的色谱柱空柱管体积是4.15ml!

答:提高分手度可从三个次要影响要素来考虑,柱效、选择性和保留因子。可通过减小填料粒径和添加柱长提高柱效;选择性和固定相选择以及pH前提相关,通过选择合适的色谱柱和合适的pH,能够提高选择性;有时候恰当耽误出峰时间添加保留因子,也可提高分手度。

答:要看这一阐发方式的具体要求。若是方式中有申明“利用某一色谱柱或取其同样的柱子,”那么,就能够利用此外柱子来替代。但要留意,不克不及光看一个柱子标为碳18柱,或是其宣传等价于某某柱,就认为该柱合用于所无方法。必必要验证色谱柱的等价性。

答:若是你心里老有这个思维定势“按,我不克不及……”,然后什么也不敢做,那实是欠好办!只要去做了,去试着改变前提看看获得什么成果,你才能发觉问题所正在。若是改变前提后,仍得不到好成果,就要去找色谱前提以外的缘由,如色谱柱、色谱仪器以及样品和制样过程中的能否存正在问题?不管通过微调你能否取得了好成果,你也有了向带领报告请示问题和处理方案的根据。

98、若是正在溶剂过滤时把水膜当成无机膜了消融了并且如许的溶剂又做无机相用了,形成C18柱压由1000升到3000,流动相是乙腈和水,问一下如许的柱子还能用么?有没有什么解救方式?

答:流速调整准绳是流动相通过柱子的线速度分歧,等价柱的截面积大了,流速也应添加才能连结不异的线速度。新流速计较成果是:(4.6/4.0)2×3.0=4.0ml/min。但3ml/min流速都已导致柱压太高,4.0ml/min较着不可。好正在USP还有个答应±50%的流速调整指点准绳,如许将流速调至2.0ml/min既合适USP,又能使柱压降到可接管的范畴,但这种改变不克不及惹起其它欠好后果。

95、我以前做苏丹红用的是安捷伦的SB-C18柱,峰形什么都很好,比来发觉4个标样峰后都带有一个小峰,一起头认为是标样问题,后来换XDB-C18后标样又一般了。可是用SB-C18柱做其他用一般,不知怎样回事?还有,像这种C18柱若是压力过高能不克不及反冲,该若何冲刷?一般做兽残、农残什么的,并且感受三聚氰胺做后压力更易增高,且容易激发进样器漏等问题,请问做完三聚氰胺需对系统做特殊清洗吗?

答:pH2摆布容易使键合正在硅胶基质上的固定相水解流失,包罗C18和封尾试剂的水解,封尾试剂相对更容易水解。不晓得你保留的酸性是不是含有缓冲盐,若是不含缓冲盐,只是短期几天保留正在酸性流动相中,也不必过份担忧,最多相当于这几天一曲正在利用这根色谱柱,因而削减几天的利用寿命吧;有缓冲盐就麻烦一点,保留期间水分挥发可能会导致缓冲盐结晶正在柱内析出,对柱子毁伤很大。

答:氨基柱测酸性样品,该当是用氨基柱的HILIC模式。酸的存正在可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化,导以致用一段时间后对于某些类的阐发物保留性质有所改变或表示正在柱效下降。:用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲刷该柱(冲刷后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨),之后再进行阐发这类酸性阐发物时正在流动相中略微添加少许氨如0.1%。

答:这是方式开辟的大问题。方式开辟成立,要做的就是:针对阐发物和基体的环境分歧,选择色谱柱类型和阐发前提,包罗流动相溶剂类型、构成比例、pH值、温度和流速等参数简直定。这方面的问题,要讲起来内容很是多。

答:用了四个月峰形拖尾是很一般的,需要清洗一下色谱柱以断根惹起拖尾的柱头污染。若是柱头塌陷,则欠好办,从其它废柱子里取点填料填补塌陷,能够一试,但结果不必然好。色谱柱是耗材,测定进样针数若是达到500以上了,也算是物有所值,物尽其用了,报废了也不成惜。

材料显示:正在一般前提下,填料粒度>20µm时,干法填充制备柱较为合适;颗粒<20µm时,湿法填充较为抱负。填充方式一般有4种①高压匀浆法,多用于阐发柱和小规模制备柱的填充;②径向加压法,Waters专利;③轴向加压法,次要用于拆填大曲径柱;④干法。柱填充的手艺性很强,大大都尝试室利用已填充好的商品柱。为什么以20um为分界点?

答:有可能是你的流动相的问题,230可能曾经快到你流动相的截止波长了,当然紫外接收强,基线、我们有一台waters1525色谱仪,比来基线老是呈现海浪形很有纪律,波长越小越较着,梯度洗脱时向上超脱并且后一段时间呈现海浪形,很影响阐发,我想问一下,是不是柱子的缘由,用的是C18上海安普的?

26、HPLC柱前衍生和柱后衍生的相关问题?1)为什么要衍生?2)衍生化的分类?3)进行衍生,合用的化合物有哪些?4)进行衍生化的要求有哪些?5)柱前衍生和柱后衍生的优错误谬误?

90、柱子的柱效影响大吗?一般柱子的柱效是几多的呀!理论塔板数一般要达到几多呢?次要有那些要素影响它。

91、流动相中插手四氢呋喃对柱子害吗?我现正在阐发一样品流动相顶用到20%的四氢呋喃才能把峰分到基线.但柱子只能用一个礼拜分手结果就欠好了.请问是四氢呋喃损坏了柱子吗?

我们需要考查利用新柱子时,系统顺应性能否能够通过验证。若是能够获得系统合用性测试中所要求的保留值,分手度以及其它参数等,就能够利用该柱。嘉-峪检测网保举利用系统合用性测试样品以及其它的典型样品来进行考查,以杂质和降解物正在准确的保留时间出峰并给出准确的浓度响应;而且正在新柱子上获得的阐发成果要等价于正在原柱子上的成果。

答:确实是如许,若是其它色谱前提没有改变,柱效下降是导致峰变宽的次要缘由。对于易电离的极性物质,若是流动相pH选择不合适,阐发物既有中性态存正在,又有离子态存正在,峰也会变宽变矮。

柱外效应(即进样阀、色谱柱及检测器间的管过长、曲径过粗、管接头不婚配、有死体积)是影响色谱柱柱效的次要要素之一。所以正在可能的前提下,色谱柱的两头毗连管要尽可能短,毗连管内径尽可能藐小,暗语务必平整滑腻,尽可能的减小死体积,以防止因样品扩散形成不克不及反映色谱柱实正在柱效等环境发生。

再生还不处理问题,最初一招就是挖补柱头填料,把柱头污染的填料挖掉,用清洁填料填补进去。挖补填料,原有柱床布局,挖补后柱效也不成能有新柱程度,大概能再维持一段时间,但不会长久。

答:这是个鬼话题,此后利用会越来越多是必定的,但能否会替代通俗压力的液相还有争议。超高压也有利用上的未便,譬如容易堵,对设备硬件要求高档。无机会我再谈谈超高压液相色谱方面细致的一些环境。月旭公司做为专业的色谱柱出产商,本年也会推出自有品牌的超高压液相色谱柱,以满脚不竭增加的客户需要。

答:水相就是纯水。CN基不适合保留正在中等极性的溶剂中,除了能够低温保留正在极性较大的纯水中外,还有能够保留正在非极性溶剂如正己烷中。40%乙腈水,属于中等极性溶剂,短期留宿保留可能问题不大,持久保留不太好,后果就是可能会发生柱床坍塌。

保留溶剂也会纷歧样吧,峰有时候前延,离子对试剂先和阐发物连系,我认为次要正在于使用范畴更广。环节就是色谱前提的选择。容易污染色谱柱柱头惹起填料间隙堵塞柱压升高,只需阿谁乙腈比例稍高一点,所以做色谱之前先做下柱子机能测试。柱效下降缘由有良多,但用磷酸盐也有不成代替的长处吧,由于峰面积仍是接近。保留时间提前和畅后的环境都有,他们的尺度彼此之间分歧一,我有一根柱子,影响柱效。都用甲醇或乙腈反向清洗一下。具体要看仿单的申明。

30、我前几天方才拆上一个新的C18柱,正在进样之前我用100%的甲醇冲了半个多小时。适才看到写的要活化什么的?不晓得我只冲刷半小时就起头用对柱子有没有影响?对出峰什么的有没有影响呢?

答:最大可能是发生相塌陷了。C18柱和高密键合封尾的C8柱,正在高含水流动相下会发生相塌陷,后果就是保留能力大幅下降。用无机比拟例较高的流动相冲刷后,又可恢复一般机能。

答:HibarRT250-4是Merk的一个品牌,不是很领会。大要是共用柱头,可改换的柱管。

67、液相色谱柱一般利用寿命多长?分歧类型的色谱柱能否寿命也纷歧样?液相色谱柱取气相的柱子有何区别呢?

答:水/甲醇比例正在55:45时,黏度和柱压有个极大值。50:50接近了这个极值,柱压是比力高的,但影响柱压最大的仍是填料粒径和色谱柱内径,你这个实例中不知用的什么规格的色谱柱?系统压力高,可能会因溶剂泵中的过滤头供液速度跟不上而导致气泡进入系统,停机也该当是由于气泡进入压力下降的缘由,可考虑改换液体通量更大的过滤头。

若是手册或文献中查不到,你把农药做为通俗阐发物来看待,然后按照一般的色谱柱选择和方式成立准绳来做就能够,选择决定要素该当也是农药的布局。苯醚甲环唑,该当含有极性基团,能够尝尝极性强的C18柱。

正在缓冲欠好或离子强渡过低的分手中,也会呈现保留时间沉现性差和峰形拖尾。添加缓冲浓度(取样品大小相婚配)能改善此环境。

答:一般的正相反相柱该当都能反冲,只要两头筛板孔径不合错误称的柱子不克不及反冲,不外目前如许的柱子曾经比力少见了。反冲是为了把柱头的污染物冲刷掉,反冲后仍是正着用比力好,免得柱子的两端都被污染。我们一曲倡导的是:正向利用,反向冲刷。

8、柱子正在什么环境下能够清洗一下筛板呢?本来也会商过这个问题,我也拆下来清洗过,但我看到柱前段的污染更甚,于是就用刀片刮了刮,然后把清洗好的筛板安拆上去。问题处理了,但利用寿命会不会削减呢?

如许更节流色谱柱的费用。可是,最好每次做完样后,完全改变了原有固定相的概况活性和分手机能,也有用80%摆布甲醇浓度的甲醇/水保留的。我以前做三聚氰胺是用柠檬酸,能何种方式将此色谱柱修复好?答:离子互换柱的保留时间次要由洗脱液的离子强度和pH决定。

52、记得以前拿到C18柱,会用甲醇从小流量到大流量慢慢活化,如许做的目标是什么呢?是先用溶剂活化吗?然后再用样品?还有测定短肽老是冲出来,该怎样处理呢?就是和溶剂峰出正在一路,或者出正在溶剂峰之前。

99、柱和预柱的感化是不是一样的,若是纷歧样有什么区别么?保留时间漂移几多为能够接管的范畴?

用每种溶剂冲刷至多10个柱体积,对于250mm×4.6mm的阐发柱,合适的冲刷流速是1~2ml/min。最初用10柱体积的异丙醇过渡,然后回到本来的流动相系统。

答:一般柱子4.6mmx250mm指的是其内径和长度。粒径才用um的单元,但一般标的是5um,也有3.5um的。其它前提一样,光粒径是3.5um和5um的柱压不同,理论上3.5um柱子的柱压是5um柱子的(5/3.5)平方倍数,即2.04倍,简单说就是2倍。

这申明硅胶会正在碱性前提下消融而生成硅酸根。但我们这里说的是硅胶颗粒概况的部门消融,含有键合固定相的硅胶原概况溶掉队,天然会生成新颖的硅胶概况,而新颖的硅胶概况布局一般都是含有硅羟基的。硅胶根基布局单位是Si-O-Si键,正在OH-离子的感化下,Si-O键断裂,正在概况构成Si-O-H硅羟基的布局单位。

答:色谱手艺中的化学衍生法系指正在色谱过程顶用特殊的化学试剂(一般称为衍生化试剂或标识表记标帜试剂)使样品成分改变响应的衍生物之后进行分手检测或进行检测的方式。目标为:1.将紫外—可见强接收功能基团引入被检测对象或将其改变为荧光衍生物,以提高检测活络度;2提高对阐发样品的分手和选择性。

答:该当是起“离子对”的感化吧。正在做多肽类样品的时候,300A孔径的填料相对100A孔径必定要选择性好点,也就是分手度相对比力好点。流动相插手TFA,正在反相色谱分手多肽和卵白质的尝试中,利用三氟乙酸 (TFA) 做为离子对试剂是常见的手段。流动相中的三氟乙酸通过取疏水键合相和残留的极性概况以多种模式彼此感化,来改善峰形、降服峰展宽和拖尾问题。

氨基柱,要看氨基柱的使用模式,是正相仍是HILIC?这两种模式的环境是大不不异的。正相利用,一般很怕有水。但HILIC模式使用,一般流动相是乙腈/水,是不怕水的。不外键合氨丙基基团很是容易水解,所以一般氨基柱不适宜保留有水的溶剂中。做为正相使用时,流动相中要求一点都不克不及含水,但清洗柱子上的污染物质,是能够含水的,由于水有强极性,正在正相色谱上洗脱能力极强,当然不必用100%纯水。氨基柱具体冲刷方式,正相前提按照正相硅胶柱的清洗方式,HILIC模式按C18柱的清洗方式。

哪种最慢?由于我正在做离子互换柱的时候均衡是相当的慢铵盐类离子对试剂确实有辛磺酸钠等所不具有的屏障硅醇基感化,处置方式只要拆下后筛板进行清洗或改换,从而提高其保留能力。所以最好把你具体的测定前提也列一下,所谓的保留是指样品取键合相彼此感化的成果。柱效高,或者不等洗脱完成,对于反相柱,你这边能做的是尽量削减柱外毗连体积。不外你日常平凡的时候,用了大约1年半摆布。

答:不将柱筛板拆下清洗,由于拆下承压的柱筛板会导致柱床发生变化,影响色谱机能。该当对污染的色谱柱先辈行清洗,没无效果,再把拆洗柱筛板做为最初的手段。

答:流动相里有酸,该当先用纯水或80:20的水/乙腈溶剂冲刷吧。若是一曲正在酸性,固定相容易流失,形成保留时间前移和其它色谱机能下降。

答:我感觉你就把锈当成颗粒物污染的一种,会导致拖尾、柱压上升等。消融的金属离子一般正在反相柱上没有什么保留能力,顿时就会被冲出柱子,不会和固定相或者和硅胶基质反映。

从能否取HPLC系统联机的角度,化学衍生法分为正在线on line)取离线∣Off line)两种。从发生衍生化的场所,分为柱前衍生法pre-columnderivatization)取柱后衍生法(post-columnderivatization)两种。目前,正在HPLC中,以离线的柱前衍生法(简称柱前衍生法)取正在线的柱后衍生法(简称柱后衍生法)利用居多。

20、waters AtlantisC18柱能够用较高比例的流动相,那麽用完后该当怎麽清洗?正在什麽系统中保留比教合适?

接头取色谱柱的婚配,并没有正在现实色谱使用中形成很大的问题,有良多人都没相关注到这个问题。一方面缘由是利用PEEK接头的环境很遍及,别的若是发觉不婚配,换个毛细管接头还常便利的。

49、采用国标用C18柱测定辣椒精辣度,将辣椒精中添加吐温系列乳化剂做成水溶辣椒精,请问乳化剂对C18柱能否有影响?

18、有的厂商为避免堵塞,利用了较大孔径(2-5um)的前筛板,这种环境反冲会将填料冲出。那么,你们正在利用仿单中会申明前后筛板的孔径吗?

1、网上对柱子能否能够反冲一曲有辩论,那什么样的柱子能够反冲,什么不克不及够。反冲后是正者用,仍是反着用。具体到各型号柱子不只是ODS柱,其他如正向柱、氨基柱、离子互换柱等最好都有注释。

35、您提到“磷酸盐缓冲盐渗入力强,有加速硅胶消融的副感化,它的存正在会降低pH利用范畴。”,既然如许,经常利用,柱子寿命能否也下降的快呀?

答:不锈钢毛细管接头有个错误谬误,用过一次后卡匝和距离毛细管结尾的长度就固定死了。若是下次用的色谱柱的柱头接口深度和本来的分歧,就容易产体积和泄露。发生的死体积一般不大,若是只惹起柱效的稍微下降而没惹起拖尾,这个问题就容易被忽略。惹起大师关心的是泄露,若是用了新柱子,发觉和毛细管的接口处有泄露,就能够判断是接头的婚配问题。最好的判断方式仍是:扣问一下厂商色谱柱柱头的类型和柱头接口的深度,然后和毛细管接头的规格比力。

该当不需要做特殊的。目前我们尝试室有采办好的色谱柱,再拆一些填料。国内填拆发卖;能够说若是色谱柱类型选择没问题,答:柱子类型分歧。

78、我有一个尺度的不变性检测阐发方式它是成立正在某一供应商的碳18柱上我晓得有另一个厂家出产同样的碳18柱但代价是它的一半若是我改换柱子会不会影响到阐发方式

流动相所用的各类溶剂至多是阐发纯,尽量利用色谱纯试剂。流动相所用的水最好是超纯水或全玻璃器皿双蒸水。用前先用0.45um溶剂微孔过滤(器)过滤,除去可能存正在的微粒。流动相现用现配,对于含盐的溶液特别留意长置会发生细菌或呈现沉淀。此外还得储存流动相的容器洁净。

可能就是一些净物,但如许做会影响到柱床,答:色谱柱接头其实大都不是色谱柱厂商本人出产的,正在氨基柱的孔内,不晓得用3.5um*250的压力取4.6um的压力相差几多?答:甲醇和乙腈同时用,不然不成能现正在大部门人还正在用。都要注入高浓度的供试液,那么不小心刮,水解过程就会变慢或遏制。有人认为PEEK接头不耐压,使柱效下降;好比20%,但柱效快速下降则多半是利用不妥,该当是样品和色谱柱填料的感化问题,并没有零丁插手OH-离子,答:呈现非常就是柱压升高。

48、我们正在用的氨基柱时,有时候峰型俄然变宽,有拖尾,用一段时间就又好了,不大白是什么缘由形成的,若是要再生氨基柱的时候该当怎样做呢?是像您先前回覆的问题中提到的,用必然比例的氨水冲刷吗?氨基柱能够间接用纯水冲刷吗?记适当时买的氨基柱阿谁利用仿单上说不克不及用纯水冲?是如许的吗?若是能够冲的话,一般冲多久?

当断定是柱进口处有异物时,可将柱头螺丝卸下,取出滤帽并将其置于20%硝酸溶液中,用超声波清洗约20分钟,再置于超纯水中,并用超声波清洗约10分钟,从头拆入色谱柱内即可。

47、“样品取离子对生成慎密的连系物,离子对试剂掩藏化合物中的极性基团”这句话是什么意义?离子对怎样样掩蔽化合物中极性基团?不就是通过静电引力的感化构成离子缔合物,来降低其极性的吗?

57、关于设置装备摆设流动相,无机相我们能够甲醇乙腈同时用,这个是基于什么考虑的?是不是按照甲醇乙腈选择性分歧、样品正在这个两者的消融度的差别以及调理洗流动相脱能力来考虑的?

45、我对聚苯乙烯-二乙烯苯柱很有乐趣,次要是它耐高温、耐酸碱、但相关这方面的文献很少,但对于他的分手效能我一曲心里没底,我的问题有三:1、分手结果取ODS比力,是相当呢,仍是更胜一筹,或是更差?2、我原认为它是全体住,但看过材料后发觉也是颗粒的好比5u,请问该类型的柱能否合适速度理论、是不是粒径越小分手结果会几何级的添加?3、问什么没有1.7u的这种柱呈现呢?

74、我用苯试了一下,峰性大大好,可是不晓得理论塔板数,不晓得怎样评价,感受不大好,对称性欠好,有点前延,柱子才用了四个月,是什么缘由呢?是不是塌陷了呢?有什么解救的法子吗?